LunaGel™ Extracellular Matrix
用于3D細(xì)胞和類(lèi)器官培養(yǎng)的，3D細(xì)胞培養(yǎng)儀

可直接使用的光交聯(lián)細(xì)胞外基質(zhì)試劑盒

LunaCrosslinker™
可見(jiàn)光交聯(lián)系統(tǒng)

1. 培養(yǎng)貼壁癌細(xì)胞（如腸癌、胃癌、肝癌）需要選擇哪種試劑盒？培養(yǎng)懸浮生長(zhǎng)的免疫細(xì)胞（如NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）應(yīng)該選擇哪種試劑盒？

答：所有的LunaGel明膠試劑盒都適合培養(yǎng)貼壁癌細(xì)胞，是LunaGel豬皮明膠和LunaGel牛骨明膠。對(duì)于培養(yǎng)免疫細(xì)胞，建議使用LunaGel牛骨明膠，因?yàn)槠鋬?nèi)毒素水平比LunaGel豬皮明膠低很多。

近期會(huì)推出一種專(zhuān)門(mén)針對(duì)免疫細(xì)胞的新試劑盒，它使用超純的明膠（沒(méi)有內(nèi)毒素）

2. 細(xì)胞樣品需要預(yù)處理嗎？如何預(yù)處理？

  答：不需要預(yù)處理。細(xì)胞從組織中提取，通過(guò)離心法制備顆粒，然后將細(xì)胞顆粒重新懸浮在LunaGel溶液中，并用移液管將溶液送到孔板進(jìn)行交聯(lián)。

3  一個(gè)試劑盒可以合成多少ml凝膠？

  答：每盒10ml。

4.  固化后是否還需要浸入培養(yǎng)基維持生長(zhǎng)？基質(zhì)中是否含有生長(zhǎng)因子？如何自己添加生長(zhǎng)因子？

  答：光凝膠不含生長(zhǎng)因子。如果需要添加，最好在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加生長(zhǎng)因子。

5. 將液態(tài)試劑-細(xì)胞混合物加入PDMS容器后再進(jìn)行固化會(huì)影響交聯(lián)過(guò)程嗎？交聯(lián)儀器對(duì)PDMS有什么影響嗎？

 答：不會(huì)。

6. 凝膠中的孔隙有多大？培養(yǎng)基、細(xì)胞因子等液體可以流過(guò)嗎？還是只能依靠擴(kuò)散？我們希望液體可以穿過(guò)基質(zhì)的孔隙，基質(zhì)能否承受住流體剪切力？會(huì)被沖碎嗎？細(xì)胞能在基質(zhì)中拉伸和遷移嗎？

  答：孔隙的大小取決于凝膠的硬度，在月交聯(lián)劑中交聯(lián)度越長(zhǎng)，毛孔越小，凝膠變得越硬。然而，即使是非常硬的凝膠也會(huì)允許基質(zhì)和細(xì)胞因子通過(guò)擴(kuò)散順利的通過(guò)凝膠，細(xì)胞存活率通常超過(guò)90-95%。這種凝膠可以承受流體剪切力而不會(huì)破裂，除非凝膠非常軟（交聯(lián)時(shí)間小于30秒在LunaCrosslinker中的光照）。凝膠被交聯(lián)到大約1.2kpa的數(shù)（50秒交聯(lián)），在沒(méi)有破裂的情況下注入基質(zhì)。

7.  由于我們希望收集基質(zhì)中的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)的ELISA或毒性、代謝組學(xué)測(cè)定，GC-MS等，所以問(wèn)基質(zhì)能否被降解？或者細(xì)胞能否被取出來(lái)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)？基質(zhì)本身的成分是否會(huì)影響這些實(shí)驗(yàn)。

  答：是的，所有光凝膠基質(zhì)都可以根據(jù)膠原酶制造商的說(shuō)明書(shū)用膠原酶降解。我們會(huì)新出一款試劑盒，*優(yōu)化和即用的LunaGel細(xì)胞釋放試劑盒，它允許細(xì)胞在30分鐘內(nèi)從凝膠中回收，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，而不會(huì)影響無(wú)菌狀態(tài)?？梢赃M(jìn)行大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)分析：如毒性、代謝活性、免疫熒光、 Qrt-PCR等，不會(huì)降解凝膠。在這種情況下，將試劑（如Alamar Blue 等）直接加入凝膠樣品的井中，并以與單層貼壁細(xì)胞相同的方式進(jìn)行測(cè)量。如果對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白感興趣，可以釋放細(xì)胞/降解凝膠。，凝膠的組成并不是很重要，它們都會(huì)在膠原酶的作用下降解，除了透明質(zhì)酸酶才能降解的LunaGel透明質(zhì)酸試劑盒。

8.  如果進(jìn)行免疫熒光拍攝需要在細(xì)胞樣品與試劑盒混合前加入染料還是細(xì)胞可以在凝膠中被染色？“血管細(xì)胞形成毛細(xì)血管"3D熒光標(biāo)記圖怎么拍，是直接將標(biāo)記好熒光的骨架放到共聚焦顯微鏡下拍攝嗎？

  答：免疫熒光的方法與用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)方法非常相似。但是，由于3D樣本中的擴(kuò)散較慢，因此需要延長(zhǎng)孵化步驟。例如，按照我們的方法制作細(xì)胞凝膠，在介質(zhì)中（基質(zhì)）中培養(yǎng)（7天或者14天），然后固定它們（例如，用4%的多聚甲醛固定1小時(shí)），并將他們儲(chǔ)存在4度的緩沖液（PBS）中，直到您準(zhǔn)備好染色，對(duì)于染色，首*行封閉（5%BSA或者緩沖液中的血清），然后在封閉緩沖液清洗2-3次，每次60分鐘，以清洗游離抗體。洗滌后，用DAP（如果需要）在阻擋緩沖液中加入輔料，孵化過(guò)夜。最后再洗2-3次，每次60分鐘，并保存樣品知道成像。

  是的，這張照片是在共聚焦顯微鏡下拍攝。

9.  Corning的356234、356235、356237、356230、356231、354248，這些產(chǎn)品和Gelomics一樣嗎？Corning的產(chǎn)品包裝有5ml和 10ml，而Gel的只有1g，這個(gè)1g的凝膠組對(duì)應(yīng)的Corning的產(chǎn)品用量是多少？

答：Corning的356234、356235、356237、356230、356231、354248都是相同材質(zhì)的（matrigel），只是濃度和體積不同。Martrigel的直接替代品是Gelonomy  LunaGel 可光交聯(lián)性細(xì)胞外基質(zhì)（10ml）低硬度（所有豬、牛、魚(yú)都可以使用），與LunaCrossLinker相結(jié)合。

GelMA更適合用于再生醫(yī)學(xué)/3D打印，它是一種干燥的材（1g），但客戶(hù)可以將其溶解在10-20ml的溶液里，具體取決于    使用者情況。如果溶解在10ml的溶液中，GelMA濃度較高（100mg/ml），材料會(huì)比濃度較低時(shí)（20ml體積，50mg/ml）更硬。

10.  有沒(méi)有對(duì)應(yīng)Corning貨號(hào)的逐一替代品。

 答：不同的Corning貨號(hào)產(chǎn)品其實(shí)都是同一產(chǎn)品的變體，只是濃度和體積不同。

12.  Corning的產(chǎn)品已經(jīng)上市30年了，非常老的技術(shù)，他們沒(méi)有月光凝膠的產(chǎn)品。

13.  目前在中國(guó)沒(méi)有銷(xiāo)售，但有國(guó)際客戶(hù)

Terasaki Institute for Biomedical Innovation

寺崎生物創(chuàng)新研究所 洛杉磯

Prof Molly Stevens （Imperial College London）

英國(guó)帝國(guó)理工學(xué)院 Molly Stevens教授

我們最新的競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手分析，演出于2022年1月，確定了總    共21個(gè)已建立的，和12家初創(chuàng)公司?？偛吭O(shè)在美國(guó)(60%)，歐洲(25%)和亞太地區(qū)地區(qū)(15%)。到目前為止最大的場(chǎng)份額由以下產(chǎn)品占據(jù)：

天然原產(chǎn)地，如Matrigel，

海藻酸鹽、膠原蛋白等。

天然生物材料是一類(lèi)

從以下位置提取的材質(zhì)含有最di限度的組織或植物操縱。Matrigel，一款產(chǎn)品，由康寧公司制造，是一種自然界最hao的例子。生物材料一直是第一個(gè)在近30年前引入直到今天，市場(chǎng)仍然存在領(lǐng)xian的產(chǎn)品。一般來(lái)說(shuō)，自然的生物材料提供了一種細(xì)胞外微環(huán)境，具有很高的生物活性，因此與細(xì)胞交互以指示它們來(lái)建造類(lèi)似人類(lèi)的組織。

然而，天然材料也承受著批次之間的顯著變化，具有粘性，很難使用，通常會(huì)限制用戶(hù)調(diào)整影響細(xì)胞行為的重要參數(shù)，如細(xì)胞外基質(zhì)硬度。其他公司提供*合成的人造細(xì)胞外基質(zhì)材料，如Q-Gel Bio的Q-Gel。它們提供了增強(qiáng)的重復(fù)性和可調(diào)性，但非常昂貴，并且缺乏天然基質(zhì)的生物活性。另一方面，GelEconomics使用的是所謂的半合成材料。結(jié)合了兩者的優(yōu)點(diǎn)，這些天然衍生材料經(jīng)過(guò)內(nèi)部化學(xué)修飾，提供了合成材料的可調(diào)性和再現(xiàn)性，同時(shí)保留了天然材料的固有生物活性。

以下是我們競(jìng)爭(zhēng)的三大企業(yè)，它們做得好和不好的是什么

我們的3D細(xì)胞培養(yǎng)儀與競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的產(chǎn)品相比如何的圖表如下所示。

價(jià)值主張與競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)

總結(jié)為什么我們的產(chǎn)品更好。

世界各地的科學(xué)家和研究人員迫切需要更好的實(shí)驗(yàn)室模型系統(tǒng)，以克服與傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題。重要的是，這個(gè)問(wèn)題的潛在解決方案不僅必須具有生物學(xué)意義，而且還必須易于使用，提供高水平的實(shí)驗(yàn)控制，具有可重復(fù)性，并以經(jīng)濟(jì)的價(jià)格克服進(jìn)入障礙，成為用戶(hù)日常工作流程的一部分。這正是Gelonomy的產(chǎn)品所提供的！

我們的價(jià)值主張如下圖所示。

相比以前的產(chǎn)品和與之競(jìng)爭(zhēng)的產(chǎn)品，LunaGelTM技術(shù)具有廣泛的優(yōu)勢(shì)。如本文件前面幾節(jié)所述，我們的半合成生物材料和交聯(lián)劑技術(shù)的主要優(yōu)勢(shì)是：

-LunaGelTM光交聯(lián)技術(shù)提供了最gao水平的實(shí)驗(yàn)控制，使研究人員能夠?qū)⒅匾募?xì)胞外基質(zhì)特性調(diào)整到程度。我們是一家提供可以調(diào)整以匹配各種人體組織特性的公司，例如大腦、肝臟、乳房、前列腺、皮膚、軟骨等等。

-LunaGelTM材料促進(jìn)自然細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，并提供生物學(xué)相關(guān)性，具有非凡的翻譯價(jià)值。

--LunaGelTM是市場(chǎng)上最快的3D細(xì)胞培養(yǎng)分析方法。例如，創(chuàng)建3D培養(yǎng)只需不到15分鐘，而市場(chǎng)領(lǐng)xian產(chǎn)品Matrigel(Corning)需要3-4個(gè)小時(shí)。

-由于交聯(lián)性獨(dú)立于天然生物材料形成水凝膠的固有能力(已知不同批次的水凝膠差別很大)，LunaGelTM提供了實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。

-我們的即用型免優(yōu)化套件和LunaCrosslinker設(shè)計(jì)極其簡(jiǎn)單，因此降低了科學(xué)家在沒(méi)有3D細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的情況下進(jìn)入市場(chǎng)的門(mén)檻。

-由于LunaGel產(chǎn)品不需要冷卻，而且粘度低于Matrigel等大多數(shù)天然生物材料，因此我們的技術(shù)與自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)*兼容，從而實(shí)現(xiàn)了3D細(xì)胞培養(yǎng)方法的可擴(kuò)展性。

下面是我們相對(duì)于市場(chǎng)領(lǐng)xian產(chǎn)品的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)的高級(jí)圖形比較和演示。

LunaCrosslinker™可見(jiàn)光交聯(lián)系統(tǒng)